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La Nagalase (n-acétylgactosaminidase) est une enzyme qui déglycosyle la protéine Gc, également connue sous le nom de protéine de liaison à la vitamine D (VDBP). La protéine Gc est ainsi rendue incapable de se convertir en GcMAF actif. En conséquence, la régulation de l’activation des macrophages est empêchée.
L'activité de l'α-N-acétylgalactosaminidase (Nagalase) dans le sérum ou le plasma est déterminée par une méthode exclusive consistant en un test d'immunocapture en deux étapes.
La Nagalase est connue pour inactiver le Gc-MAF et son précurseur naturel, la Gc-globuline. Il est proposé que les patients puissent être traités par thérapie de substitution avec Gc-MAF et que la Nagalase a été projetée comme marqueur (indicateur) d'efficacité de la thérapie Gc-MAF.
Nous souhaitons vous informer que nous avons mis en œuvre une nouvelle méthode améliorée pour la mesure de la Nagalase des patients, rapportée sous le nom de NAGAnew. Il présente une mesure améliorée de la nagalase différenciant l'activité de la nagalase libre, la quantité liée de nagalase non active et la quantité totale de nagalase (libre et liée).
Les valeurs de la nouvelle méthode de mesure de la Nagalase sont différentes de celles qui ont été rapportées précédemment et les limites normales (P10 – P90) sont différentes de celles rapportées précédemment (nouvelle évaluation basée sur des sérums de personnes normales en bonne santé) qui doivent être comparées à la répartition des valeurs observées chez différents types de patientes (cancer du sein, cancer des ovaires, cancer du côlon, cancer du pancréas …) L'utilisation de ces 3 paramètres et leur augmentation dans le sang peut être utilisée comme valeur diagnostique et pronostique pour un certain type de cancer dans chaque patient. Leur valeur peut être déterminée. Le coût de cet ensemble d'analyses sera facturé l'équivalent de l'ancien ensemble de paramètres. Une tarification séparée est mise en place pour la détermination des niveaux du complexe Nagalase-GcMAF.
Dans l'ancien test NAGALASE, le niveau apparent de Nagalase représente l'activité enzymatique de la Nagalase déterminée sur du sérum dilué avec un substrat spécifique dérivé de l'ombelliféryle, mais la méthode analytique est une mesure cinétique. Dans la nouvelle méthode appelée Nagalase libre, nous utilisons également le même substrat dérivé de l'ombelliféryle. pour la Nagalase, mais la méthode de détermination est une mesure du point final, ce qui rend le test plus robuste et moins sujet aux interférences. Dans l'ancienne méthode, l'étalonnage était basé sur un pool de sérum de plus de 300 donneurs, tandis que dans la nouvelle méthode, l'étalonnage était basé sur le signal d'une quantité exacte basée sur le poids du produit final du substrat converti, c'est-à-dire l'ombéliférone. Cette approche d'étalonnage et la méthode de mesure du point final rendent la détermination plus stable et robuste.
Dans la nouvelle méthode, l'intervalle a de nouveau été déterminé sur une population de plus de 300 témoins normaux en bonne santé et, comme prévu, cet intervalle est situé plus bas que dans l'ancienne méthode. Ceci est en accord avec les valeurs médianes obtenues sur des donneurs normaux sains pour les deux méthodes soit 0,73 pour l'ancienne méthode et 0,43 pour la nouvelle méthode.
Pour l'élément Nagalase efficace (ancienne) et Nagalase totale (nouvelle), ces deux éléments sont destinés à donner une idée de la quantité totale de Nagalase en circulation, c'est-à-dire. la nagalase libre (mesurée directement par son activité enzymatique) plus la nagalase liée circulante (enzymatiquement inactive ou bloquée).
Pour ces paramètres, nous observerons de plus grandes différences entre l’ancienne et la nouvelle méthode. Dans l'ancienne méthode, la Nagalase efficace était dérivée d'un calcul basé sur les niveaux de Nagalase libre et de Gc-globuline. Dans la nouvelle méthode, la Nagalase totale (libre + liée) est précipitée du sérum, convertie en enzyme enzymatique active et mesurée. comme teneur totale en Nagalase du sérum. Les plages normales et les valeurs médianes dans les deux méthodes ont été déterminées sur une population témoin normale et saine de 300 témoins normaux et sains.
Pour des raisons de comparaison, vous pouvez appliquer le principe des ratios de l'ancien résultat par rapport à la valeur médiane de la population normale, c'est-à-dire l'ancienne valeur supérieure à 1,03 (ancienne méthode médiane), par rapport au rapport de la valeur nouvelle méthode supérieure à 1,44 (nouvelle méthode médiane). , puis le rapport des 2 valeurs obtenues.
En plus de l'ensemble de paramètres mentionné ci-dessus, un paramètre totalement nouveau a été développé pour avoir une idée de la réponse de la réponse immunitaire innée. La réponse immunitaire innée du patient est modulée par l’activité des macrophages, des monocytes et des cellules dendritiques. Cette activité est stimulée par un facteur d’activation des macrophages, à savoir le Gc-MAF, présent en très faible concentration dans le sang.
De plus, ce Gc-MAF est immédiatement éliminé après sa liaison à la Nagalase et sa liaison aux macrophages, monocytes et cellules dendritiques qui sont activés. Jusqu’à présent, personne n’a pu mesurer le Gc-MAF libre dans le sérum ou le plasma.
Cependant, outre la capture cellulaire du Gc-MAF, ce facteur d'activation est également éliminé du sang sous forme d'un complexe stable avec l'enzyme Nagalase et la quantité de ce complexe Nagalase-GcMAF est un paramètre supplémentaire pour surveiller la défense immunitaire innée. S'il y a une invasion par des cellules cancéreuses, il y a apparemment un système immunitaire inné défectueux en raison d'une faible production de Gc-MAF à partir de son précurseur Gc-globuline. Une diminution du complexe Gc-MAF circulant est un marqueur d'un système immunitaire inné défectueux et peut être utilisée pour le diagnostic du cancer et pour le suivi du traitement du cancer avec une supplémentation de type Gc-MAF. Cet ensemble de paramètres supplémentaires sera facturé séparément lorsque ce test sera demandé par le médecin.
La méthode de détermination de la Gc-globuline est passée de la turbidimétrie à une méthode ELISA. Cependant, l'étalonnage des deux tests est resté le même et la norme des deux méthodes est basée sur un pool de sérums comprenant plus de 300 sérums de personnes témoins normales et en bonne santé. Les plages normales pour l'ancienne version du test et la nouvelle version du test ont été basées sur les valeurs centiles P10 (limite inférieure) et P90 (limite supérieure) des sérums de plus de 300 contrôles sains normaux.
La valeur médiane de cette population normale s'est légèrement décalée de 420,71 mg/L (ancienne méthode) à 451,03 pour la nouvelle méthode (ELISA). La Gc-globuline est principalement synthétisée dans le foie et des variations physiologiques peuvent être attendues en fonction du temps et de la fonction hépatique. Ce n'est que si la Gc-globuline a tendance à diminuer continuellement que cela peut indiquer un déclin de la fonction hépatique conduisant finalement à une insuffisance hépatique. Cependant, ce n’est qu’à des niveaux inférieurs à 100 mg/L qu’il existe un risque aigu d’insuffisance hépatique. À des niveaux supérieurs à 300 mg/L, il n’y a certainement aucune raison d’admettre que le niveau de ce précurseur devrait influencer la synthèse normale de Gc-MAF et affecter le système immunitaire inné.
La valeur DPP4 est toujours fournie et la méthode reste la même. DPP4 est un marqueur d'activation des lymphocytes T présent sur de nombreuses cellules immunitaires, mais il augmente lors de l'activation immunitaire. Une partie de la DPP4 liée à la membrane peut être excrétée dans le plasma/sérum où elle est mesurée. Une valeur accrue de Dpp4 devrait être associée à une activation immunitaire d’origine différente (infection, inflammation, auto-immunité, etc.). De faibles niveaux de DPP4 ont été associés au syndrome de fatigue chronique et certaines tumeurs peuvent excréter de très grandes quantités de DPP4 dans le sérum.
Ainsi, les nouveaux formulaires de demande indiquent 2 panels Nagalase :
NAGAnew1 (prix "même", 108€ pour l'Europe, 125$ pour les USA), affichant 4 paramètres :
Nagalase totale
Nagalase gratuit
Nagalase lié et
DPP4.
NAGAnew2 (205€ pour l'Europe, 240$ pour les USA), affichant 6 paramètres :
Nagalase totale
Nagalase gratuit
Nagalase lié et
Complexe Nagalase-GcMAF
Protéine Gc et
DPP4.
Collecte d'échantillons
Test sur le sérum: Le sang total doit être collecté dans des tubes à sérum (comme le tube avancé BD Vacutainer SST II, capuchon jaune). Les tubes doivent être centrifugés par l'infirmière/médecin à 3000 tr/min pendant 10 minutes après une heure de coagulation à température ambiante. Le sérum doit être aliquoté dans de nouveaux tubes stériles et congelés. Congelez immédiatement au moins 3ml de sérum et envoyez-le au laboratoire dans de la glace sèche. L'échantillon doit être conservé congelé à tout moment. Le tube de sérum centrifugé peut être expédié à température ambiante si sa livraison est assurée dans les 24 heures après le prélèvement sanguin.
